细胞培养——细胞冻存

细胞培养在实验完成后需要将细胞冻存存放起来,以便以后实验需要,可以将冻存的细胞直接复苏使用。然而为了使复苏得到的细胞状态好,可直接用于实验,细胞在冻存时的状态就显得尤为重要,一定要选择细胞培养状态好的时候将细胞冻存起来,其次是冻存细胞的方式和条件,冻存液的选择等对细胞冻存都很重要。

细胞培养在实验完成后需要将细胞冻存存放起来,以便以后实验需要,可以将冻存的细胞直接复苏使用。然而为了使复苏得到的细胞状态好,可直接用于实验,细胞在冻存时的状态就显得尤为重要,一定要选择细胞培养状态好的时候将细胞冻存起来,其次是冻存细胞的方式和条件,冻存液的选择等对细胞冻存都很重要。

下面简单介绍一下细胞冻存方面的知识

一、什么是细胞冻存?

细胞放在低温环境,减少细胞代谢,以便长期储存。

二、细胞冻存的具体操作步骤

1、配制含10%DMSO、90%胎牛血清的冻存液或市面上购买的冻存液。

2、从培养箱取出细胞培养瓶(一般选择处于对数期的细胞),转移到超净台。弃去原有培养液,用1-2mL PBS缓冲液洗涤1次(注意从侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。

3、向培养瓶中加入1mL胰酶,消化,将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,转移到超净台。

4、加入2mL完全培养基,终止消化。用移液器充分缓慢吹打,使细胞能够完全脱落。然后将细胞悬液转移至15mL离心管中,1000rpm/min离心5分钟,转移进超净台,打开盖子,弃去上清。

5、加入适量冻存液,用移液器轻轻吹打细胞团块,制备成细胞悬液,调节冻存液中细胞密度,根据经验按照T25培养瓶一瓶冻存2-3管,将细胞分装入冻存管中,每管1-1.5 ml。

6、在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。

7、将装有细胞的冻存管放入4℃冰箱30min,后-20℃冰箱30min,然后放入-80℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。或按照冻存液说明书操作。

注意事项

1.使用DMSO前,不需要进行高压灭菌,它本身就有灭菌的作用。高压灭菌反而会破坏它的分子结构,以至于降低冷冻保护效果。在常温下,DMSO对人体有害,故在配制时最好戴上手套操作。

2.细胞冻存注意要慢冻,按照温度梯度降温法进行,不宜将冻存细胞放置在0℃~-60℃这一温度范围内过久,低温损伤主要发生在这一温度区内,是“危险温区”,实验操作中可将细胞冻存管装在程序降温盒中再放入-80℃冰箱,使之以约1℃/min的降温速度渡过“危险温区”后保留在低温冰箱或转移至液氮罐。

3.注意定期检查液氮罐内液氮量,及时添加。

发布于:2022-06-26